服务介绍：

  原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

实验结果展示：

  1、人 –肿瘤-mir-155-原位杂交(DAB)

  2、人 –肿瘤-mir-608-原位杂交(DAB)

实验流程：

  1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。

  3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。

  4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  6、阻断内源性过氧化物酶：滴加3%甲醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

  7、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  8、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液, 恒温箱 37度杂交过夜。

  9、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

  10、滴加封闭液：滴加封闭血清 BSA。室温30min。

  11、滴加鼠抗地高辛标记过氧化物酶(anti-DIG-HRP)：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min，后PBS洗4次×5min。

  12、DAB显色：切片稍甩干后，在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。

  13、复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右，自来水洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水洗，氨水返蓝，流水冲洗。

  14、脱水封片：将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I 6min—100%酒精II 6min-正丁醇6min—二甲苯透明，将切片从二甲苯中拿出稍晾干后，中性树胶封片。

  15、显微镜检，图像采集分析。

结果判读：

  阳性为棕黄色，细胞核为蓝色。

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

实验结果展示：

  1、人 –皮肤-BCIP/NBT

  2、小鼠-mir-26a-肿瘤-BCIP/NBT

实验流程：

  1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。

  3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。

  4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  6、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  7、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液,恒温箱 37度杂交过夜。

  8、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

  9、滴加封闭液：滴加封闭血清 BSA。室温30min。

  10、滴加鼠抗地高辛标记碱性磷酸酶(anti-DIG-AP)：倾去封闭液，滴加anti-DIG-AP。37°C孵育40min，后TBS洗4次×5min。

  11、BCIP/NBT显色：滴加BCIP/NBT显色液，显微镜观察阳性。后纯水冲洗。

  12、复染细胞核：滴加核固红染液，染核至合适程度后纯水冲洗。

  13、封片：自然风干后，中性树胶封片。

  14、显微镜检，图像采集分析。

结果判读：

  阳性为蓝色，蓝紫色。细胞核为红色。

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

实验结果展示：

  1、人-肠-SEMA3B-AS1-原位杂交(FISH单标)

  2、人-肿瘤-端粒(telc)-原位杂交(FISH单标)

实验流程：

  石蜡切片荧光探针原位杂交实验步骤

  1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。

  3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。

  4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  6、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  7、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液, 恒温箱37度杂交过夜。

  8、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

  9、DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

  10.镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光;CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。)DAPI染核，为蓝光。

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

服务介绍：

  原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。IF即免疫荧光，可检测组织或细胞中某蛋白的表达情况及定位。

  原位杂交(FISH、IF双标)可以检测靶基因与靶蛋白的共定位情况。

实验结果展示：

  1、小鼠-血管-mir-19a(红)+a-sma(绿)-原位杂交(FISH、IF双染)

  2、小鼠-脑-mir-376(绿)+GFAP(红)-原位杂交(FISH、IF双染)

实验流程：

  石蜡切片荧光探针原位杂交与免疫荧光双标实验步骤

  1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，包埋。

  3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。

  4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  6、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  7、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液,恒温箱37度杂交过夜。

  8、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

  9、孵育一抗：滴加一抗，PBS稀释。4°过夜。后PBS洗3×5min。

  10、孵育二抗：滴加相应二抗，室温孵育50min。后PBS洗3×5min。

  11、DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

  10.镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光;CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。)

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

实验结果展示：

  1、细胞爬片-MalaT1(红)+mir-3064-5p(绿)-原位杂交(FISH双标)

实验流程：

  细胞爬片荧光探针原位杂交双标实验步骤

  1、细胞爬片固定：细胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

  2、消化：基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。.

  3、预杂交：滴加预杂交液37°恒温箱1h。

  4、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针1杂交液，37度杂交过夜。

  5、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤

  6、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针2杂交液，37度杂交过夜。

  7、DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

  8、镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光;CY3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。)

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

服务介绍：

  原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。实验采用三种标记不同荧光素的不同探针，同时检测一个样本。适用于各类细菌检测和其他基因检测。

 实验结果展示：

  1、污泥-原位杂交(FISH三标)1

  2、污泥-原位杂交(FISH三标)2

实验流程：

  1、污泥切片固定：切片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

  2、消化：基因笔画圈，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化20min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。.

  3、预杂交：滴加预杂交液37°恒温箱1h。

  4、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针1，探针2，探针3杂交液，37度杂交过夜。

  5、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤

  6、DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

  7、荧光全景扫描。

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

服务介绍：

  原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。原位杂交亦可以应用于组织芯片的检测。结果更丰富，更具有对比性。

 实验结果展示：

  1、 人-肠-mir-608-原位杂交(芯片)DAB

实验流程：

  1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  2、消化：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10-15分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  3、阻断内源性过氧化物酶：滴加3%甲醇-H2O2，室温避光孵育15min，将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

  4、预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  5、杂交：倾去预杂交液，滴加含探针杂交液, 恒温箱 37度杂交过夜。

  6、杂交后洗涤：洗去杂交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加甲酰胺洗涤。

  7、滴加封闭液：滴加封闭血清 BSA。室温30min。

  8、滴加鼠抗地高辛标记过氧化物酶(anti-DIG-HRP)：倾去封闭液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min，后PBS洗4次×5min。

  9、DAB显色：切片稍甩干后，在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。

  10、复染细胞核：Harris苏木素复染3min左右，自来水洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水洗，氨水返蓝，流水冲洗。

  11、脱水封片：将切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I 6min—100%酒精II 6min-正丁醇6min—二甲苯透明，将切片从二甲苯中拿出稍晾干后，中性树胶封片。

  15、显微镜检，图像采集分析。

结果判读：

  阳性为棕黄色，细胞核为蓝色。

送样运输要求：

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;芯片切片常温运输。

服务介绍：

  原位杂交与免疫荧光原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。免疫荧光就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

  通过原位杂交及免疫荧光双抗进行三标，可以在组织细胞中对核酸分子和蛋白指标同时进行共定位、以及定性分析，可以用来从共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

 实验流程：

  石蜡切片荧光探针原位杂交与免疫荧光双抗三染实验步骤

  1. 组织固定、脱水、切片、石蜡切片脱蜡至水;

  2. 消化：切片于修复液中煮沸10-15分钟，滴加蛋白酶K消化;

  3. 预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  4. 杂交：倾去预杂交液，滴加含探针 杂交液, 浓度 ，恒温箱 度杂交过夜。

  5. 杂交后洗涤：SSC洗涤;

  6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃过夜，后PBS洗3×5min;滴加相应二抗，室温孵育50min，PBS洗3×5min;

  7. 孵育另一抗、二抗：滴加一抗，4℃过夜，后PBS洗3×5min;滴加相应二抗，室温孵育50min，PBS洗3×5min;

  7. DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

  8. 镜检拍照;

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。

服务介绍：

  原位杂交与免疫荧光原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。免疫荧光就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体或抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

  通过原位杂交双探针及免疫荧光进行三标，可以在组织细胞中对核酸分子和蛋白指标同时进行共定位、以及定性分析，可以用来从共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。

实验流程：

  石蜡切片荧光探针原位杂交双探针与免疫荧光三染实验步骤

  1. 组织固定、脱水、切片、石蜡切片脱蜡至水;

  2. 消化：切片于修复液中煮沸10-15分钟，滴加蛋白酶K消化;

  3. 预杂交：滴加预杂交液，37°C孵育1h。

  4. 杂交：倾去预杂交液，滴加含探针probe1+probe2 杂交液, 浓度 ，恒温箱 度杂交过夜。

  5. 杂交后洗涤：SSC洗涤;

  6. 孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃过夜，后PBS洗3×5min;滴加相应二抗，室温孵育50min，PBS洗3×5min;

  7. DAPI复染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min;

  8. 镜检拍照;

送样运输要求：

  冰切。标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20°运输。

  石蜡。标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。

  细胞爬片。细胞爬片加原位杂交固定液固定15min后，密封，4度运输。共聚焦皿

  新鲜组织：组织取出后可以立即冷冻处理，后干冰运输到武汉进行后续冰冻切片处理。新鲜组织-80°保存。